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革蘭氏染色液
英文名稱：
貨 號 ：KS0009
規(guī) 格 ：5ml*5支
價格：電詢
用途：用于革蘭氏染色。(BR試劑)
瀏覽次數(shù)：956次
革蘭氏染色液使用說明書
【試劑盒組成】
1. 結晶紫染色液：5ml×1 支
2. 碘液：5ml×1 支
3. 脫色液：5ml×2 支
4. 沙黃復染液：5ml×1 支
【原理】
通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合 物，革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮 脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙， 因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁 薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅 速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出，因此通過乙醇脫色后 仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
【操作方法】
1. 準備好革蘭氏染色所需試劑、玻片、吸水紙、鑷子、接種環(huán)、廢液缸、洗瓶、去離 子水、酒精燈等，待檢測的菌株一般應為新鮮培養(yǎng)物；
2. 以酒精擦拭玻片，在酒精燈上干燥后，用接種環(huán)挑取一環(huán)滅菌的去離子水或生理鹽 水到載玻片上，挑取少量純培養(yǎng)物在水滴上涂抹至均勻分散，將涂片在酒精燈火焰 上滅活、固定；
3. 加結晶紫溶液 1-2 滴，染色 1 分鐘，用去離子水輕輕從培養(yǎng)物上方流過水洗； 4. 待干，加革蘭氏碘液，作用 1 分鐘，用去離子水輕輕從培養(yǎng)物上方流過水洗；
5. 加脫色液（95%酒精），不時搖動玻片，直至無紫色脫落為止（約 10-20 秒），用去 離子水輕輕從培養(yǎng)物上方流過水洗；
6. 待干，加復染液，復染 30 秒。用去離子水輕輕從培養(yǎng)物上方流過水洗，待玻片干 燥后鏡檢；
7. 油鏡鏡檢。菌體呈紫色者為革蘭氏陽性菌；呈紅色者為革蘭氏陰性菌。
【注意事項】
1. 培養(yǎng)物要新鮮，以免對結果的判斷造成影響；
2. 酒精洗脫為關鍵步驟，不可長時間洗脫，以免對結果判斷造成影響； 3. 碘液容易揮發(fā)，平時應擰緊瓶蓋、避光保存；
4. 涂片可采用自然風干、干燥箱等方法進行干燥；
5. 每一步水洗時，注意不要直接對著涂片沖洗，水流應從上方流經涂片，輕輕水洗。
